استخراج DNA/RNA در روش ستونی
استخراج DNA/RNA مبتنی بر ستون یک روش استخراج فاز جامد برای تمیز کردن سریع اسیدهای نوکلئیک است . این روش به این واقعیت متکی است که اسید نوکلئیک تحت شرایط خاصی به فاز جامد سیلیس متصل می شود.
مراحل کار در استخراج DNA/RNA به روش ستونی لیز سلولها ، اتصال اسید نوکلئیک به غشای ژل سیلیکا ، شستن اسید نوکلئیک متصل به غشای ژل سیلیکا و شستشوی اسید نوکلئیک است. .
برای لیز شدن ، سلولهای یک نمونه با روش لیتیک پردازش می شوند که همان شکستن غشای سلولی و آزاد سازی اسید نوکلئیک است.
برای اتصال ، یک محلول بافر به همراه اتانول یا ایزوپروپانول به نمونه اضافه می شود . این فرایند اتصال را تشکیل می دهد. محلول به یک ستون منتقل می شود و ستون در سانتریفیوژ قرار می گیرد . در سانتریفیوژ ، درصورت بهینه بودن pH و غلظت نمک محلول ، اسید نوکلئیک با عبور از محلول به غشای ژل سیلیکا متصل می شود.
در مرحله شستن ، یک بافر شستشو به ستون اضافه می شود. ستون مجدداً در سانتریفیوژ قرار داده می شود و بافر را شستشو می دهد. این باعث می شود ناخالصی های باقیمانده از غشاء خارج شود و فقط اسید نوکلئیک متصل به ژل سیلیس بماند.
برای شستشو مرحله آخر ، یک بافر شستشو دیگر به ستون اضافه می شود. ستون مجدداً در سانتریفیوژ قرار داده می شود بافر شستشو اسید نوکلئیک را از غشاء خارج کرده و اسید نوکلئیک از انتهای ستون جمع می شود.
به اختصار استخراج DNA/RNA به روش ستونی منوط به حذف پروتئین‌های سلولی و هیستونی متصل به دی‌ان‌ای میباشد که به سه روش زیر انجام میگیرد:
- با اضافه کردن پروتئاز
- از طریق رسوب دهی پروتئین‌ها با سدیم یا آمونیوم سولفات
- یا خارج سازی آن‌ها از طریق یک ترکیب فنل- کلروفرم که این کار باید قبل از رسوب دادن دی‌ان‌ای انجام گیرد.
پس از استخراج، دی‌ان‌ای را به آرامی در یک بافر قلیایی (معمولاً در بافر TE )
یا در آب خالص حل می‌کنند.
